尊龙凯时为您提供高质量的pEGFP-ADRB2(human)质粒，规格为05ug的质粒干粉。收到产品后，请先根据管壁标签确认产品形式，并在扩增前仔细查阅该质粒菌株的抗性、感受态及培养温度。

EGFP-ADRB2(human)质粒扩增流程

1. 质粒干粉（常温运输，存储于-20℃，保质期90天）。请务必进行转化并挑选单克隆培养，切勿直接使用或测序。

1. 收到质粒干粉后，先以5000rpm离心1分钟，然后加入20μl去离子水溶解质粒；
2. 取1支100μl感受态菌株在冰上解冻10分钟，加入2μl质粒，再冰浴30分钟，进行42℃热激60秒，静置后再冰浴2分钟（以下步骤应在超净工作台中无菌操作）；
3. 加入900μl无抗LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45分钟；
4. 以6000rpm离心5分钟，保留100μl上清液重悬细菌沉淀，涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用尊龙凯时专用涂布玻璃珠，以获得更多转化子）
5. 平板正向培养1小时后倒置，37℃培养14小时（如需在30℃下培养则延长至20小时）。如菌落过多，请进行质粒稀释后再转化，无菌落时可加入10μl质粒进行转化。>另外，切勿直接转化表达感受态，需先转化克隆感受态，提取质粒后再导入表达感受态；
6. 挑取单菌落至LB液体培养基中，添加相应抗生素，220rpm震荡培养14小时，根据实验需求和质粒提取试剂盒说明进行质粒提取。

不同类型的存储和培养方法

2. 甘油菌种（冰袋运输，存放于-80℃，保质期90天）。请进行划线挑选单克隆培养，酵母菌需先液体复苏后再进行划线处理。
3. 穿刺菌种（冰袋运输，存放于4℃，保质期7天）。采用穿刺接种，再液体培养后四区划线及挑取单菌落进行培养。
4. 菌落平板（冰袋运输，存放于4℃，保质期7天）。可以直接挑取单菌落至液体培养基中。
5. 液体质粒（冰袋运输，存放于-20℃，保质期90天）。单独提取的液体质粒可直接使用。
6. 滤纸质粒（常温运输，存放于-20℃，保质期90天）。收到货后将滤纸圈剪下放入EP管中，加入100μl无菌水湿润并浸泡5分钟，吸取5μl进行转化，离心全涂。

质粒提取操作步骤

实验原理：碱裂解法提取质粒通过共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA的拓扑学差异进行分离。在特定pH范围内，线性DNA解开变性，而共价闭合质粒DNA仍保持完整。

1. 准备20ml灭菌过的培养管，编号，分别加入8ml LB培养基，再添加8μl相应抗生素；
2. 用10μl枪头挑取单个菌落至培养管中，37℃震荡过夜（274rpm）；
3. 取2ml过夜培养的菌液加入离心管中，室温10000rpm离心2分钟，去上清；
4. 向残留的菌体沉淀中加入250μl Buffer P1（含RNase A），混匀悬浮菌体；
5. 加入250μl Buffer P2，轻轻上下颠倒混匀，获得澄清的裂解液；
6. 加入350μl Buffer N3，快速轻轻上下颠倒混匀，室温10000rpm离心15分钟；
7. 将上清液转移至洁净的吸附柱中，并离心以去除废液；
8. 多个洗涤步骤，确保去除杂质并增加纯度；
9. 最后，在吸附柱中加入Buffer EB，离心以收集纯化的质粒；

注意事项

1. 使用之前在Buffer P1中加入RNA酶，4℃保存。
2. 提前将Buffer EB在65~70℃水浴预热，以提高提取效率。

更多质粒载体和生物医疗产品，请咨询尊龙凯时，我们致力于为您提供卓越的科研支持。